dor_id: 1501348

506.#.#.a: Público

650.#.4.x: Biotecnología y Ciencias Agropecuarias

336.#.#.b: other

336.#.#.3: Registro de colección de proyectos

336.#.#.a: Registro de colección universitaria

351.#.#.b: Proyectos Universitarios PAPIIT (PAPIIT)

351.#.#.a: Colecciones Universitarias Digitales

harvesting_group: ColeccionesUniversitarias

270.1.#.p: Dirección General de Repositorios Universitarios. contacto@dgru.unam.mx

590.#.#.c: Otro

270.#.#.d: MX

270.1.#.d: México

590.#.#.b: Concentrador

883.#.#.u: https://datosabiertos.unam.mx/

883.#.#.a: Portal de Datos Abiertos UNAM, Colecciones Universitarias

590.#.#.a: Administración central

883.#.#.1: http://www.ccud.unam.mx/

883.#.#.q: Dirección General de Repositorios Universitarios

850.#.#.a: Universidad Nacional Autónoma de México

856.4.0.u: http://datosabiertos.unam.mx/DGAPA:PAPIIT:IN217210

100.1.#.a: Ignacio López González

524.#.#.a: Dirección de Desarrollo Académico, Dirección General de Asuntos del Personal Académico (DGAPA). "Inhibición de la expresión de los canales de K+ shal, shab y shaw en los cuerpos fungiformes de Drosophila melanogaster", Proyectos Universitarios PAPIIT (PAPIIT). En "Portal de datos abiertos UNAM" (en línea), México, Universidad Nacional Autónoma de México.

720.#.#.a: Ignacio López González

245.1.0.a: Inhibición de la expresión de los canales de K+ shal, shab y shaw en los cuerpos fungiformes de Drosophila melanogaster

502.#.#.c: Universidad Nacional Autónoma de México

561.1.#.a: Instituto de Biotecnología, UNAM

264.#.0.c: 2010

264.#.1.c: 2010

307.#.#.a: 2019-05-23 18:40:21.491

653.#.#.a: Memoria y aprendizaje; Neurociencias

506.1.#.a: La titularidad de los derechos patrimoniales de este recurso digital pertenece a la Universidad Nacional Autónoma de México. Su uso se rige por una licencia Creative Commons BY 4.0 Internacional, https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/legalcode.es, fecha de asignación de la licencia 2010, para un uso diferente consultar al responsable jurídico del repositorio por medio de contacto@dgru.unam.mx

041.#.7.h: spa

500.#.#.a: Aunque en años recientes se ha logrado un gran avance en la identificación de los elementos y mecanismos moleculares involucrados en los procesos de aprendizaje y memoria asociativa, poco se sabe sobre el papel fisiológico de los canales de K+ dependientes de voltaje shal, shab y shaw en la determinación de las propiedades electrofisiológicas de las estructuras del cerebro de Drosophila involucradas en estos procesos._x000D_ Como se menciona en el protocolo, las evidencias experimentales han demostrado que la corriente de K+ tipo A, una corriente iónica transitoria, está involucrada en la adecuada formación de la memoria asociativa en varias especies, incluyendo a los mamíferos. Recientemente se demostró que los cuerpos fungiformes (MBs) expresan los mensajeros para los canales de K+ tipo Shaker, Shal, Shab y Shaw, de los cuales Shaker y Shal codifican para corrientes de K+ tipo A (Gasque et al., 2005). Las moscas mutantes para el canal de K+ Shaker presentan deficiencias en el aprendizaje asociativo. Sin embargo, un estudio reciente demostró que los canales Shaker se expresan solo en una fracción menor en las neuronas de los MBs, el área del cerebro de la mosca responsable de la memoria olfativa asociativa. Esta última observación abre la posibilidad de que algún otro canal de K+ nativo de los MBs, como son Shal, Shab y Shaw, pueda tener un papel relevante en memoria y aprendizaje. En el presente proyecto tenemos como objetivo evaluar si los canales de K+ Shal, Shab y Shaw son importantes para determinar las propiedades electrofisiológicas de los MBs de Drosophila. Para nosotros resulta de particular interés explorar el papel del gen shal ya que este se expresa en una fracción mayor de las neuronas de los MBs y, al igual que el gen shaker, codifica para una corriente de K+ tipo A. Las características biofísicas propias de shal lo hacen el candidato más fuerte para participar en memoria y aprendizaje. Cabe mencionar que hasta la fecha, no se ha podido evaluar la participación de los canales de K+ Shal, Shab y Shaw en memoria asociativa por que no existen líneas de moscas mutantes que presenten deficiencias en la expresión de estos canales exclusivamente en los MBs. En los últimos tres años, nuestro laboratorio ha desarrollado diferentes herramientas moleculares que nos permitirán abordar el problema de la participación de los canales Shal, Shab y Shaw en los fenómenos de plasticidad sináptica relacionados con el aprendizaje y la memoria. Así, actualmente contamos con subunidades 1 dominantes negativas (Shaker V718D, Shal L371D, Shab V624D y Shaw V378D) y con RNAs interferentes (vectores psymp-UAST Shaker, psymp-UAST Shal y psymp-UAS TShab) contra los cuatro canales de K+ presentes en los MBs. Con estas construcciones, hemos generado y establecido las líneas de moscas trangénicas necesarias para realizar la inhibición específica de cada tipo de canal de K+ en los MBs de Drosophila y así evaluar la posible participación de Shal, Shab y Shaw en memoria. En este momento ya contamos con una línea de moscas transgénicas que portan a la subunidad 1 dominante negativa contra el canal de K+ Shal (denominada Shal [17]); y tres líneas independientes de moscas transgénicas que poseen a la dominante negativa contra el canal Shaw (denominadas Shaw [31F], Shaw [30/31] y Shaw [30/31.1]). De igual forma, hemos establecido 10 líneas de moscas transgénicas producidas en nuestro laboratorio que contienen a los RNAis contra los canales de K+ dependientes de voltaje. Cuatro de estas líneas de moscas portan al RNAi contra los canales de K+ tipo Shaker (Shaker [49.4], Shaker [31], Shaker [14.1R] y Shaker [14.18]); cuatro contienen el RNAi contra los canales de K+ tipo Shab (Shab [16.1], Shab [8.1], Shab [10] y Shab [21]); dos líneas portan los RNA interferentes contra los canales Shaw (Shaw2822R -1 y Shaw2822R-2); y dos líneas de moscas contienen al RNAi contra el canal de K+ tipo Shal (Shal [41] y Shal [5]). Ya hemos iniciado con la evaluación funcional in vivo de las líneas de moscas que contienen a las subunidades dominantes negativas y los RNAis contra los distintos canales de K+ y nuestros resultados recientes indican que al expresar de manera ubicua (en toda la mosca) a las dominantes negativas contra los canales Shal (Shal [17]) y Shaw (Shaw [30/31.1]) se reproduce consistentemente un fenotipo de letalidad reportado anteriormente. Esto nos indica que, al menos, las dominantes negativas hasta ahora evaluadas funcionan de manera eficiente en la mosca. Más aún, nuestras líneas de moscas transgénicas con las dominantes negativas contra los canales Shal y Shaw resultaron más eficientes que líneas de moscas que portan a los RNAis contra los mismos canales de K+ provenientes de otros centros de investigación. Como se mencionó anteriormente, la falta de este tipo de líneas de moscas transgénicas ha evitado que se pueda evaluar el papel de los canales de K+ en aprendizaje y memoria. por lo que la primera contribución importante de este proyecto son, precisamente, las líneas de moscas transgénicas arriba mencionadas (Shal [17]), Shaw [30/31.1], etc). Consideramos que estas líneas transgénicas podrían ser de interés para otros grupos involucrados en biofísica y neurociencias lo que nos permitirá establecer diferentes colaboraciones._x000D_ La primera parte del proyecto corresponde a la generación y evaluación de las líneas de moscas que porten a las dominantes negativas contra los canales Shaker y Shab que nos faltan. Para esto seguiremos la misma estrategia experimental que utilizamos para establecer las líneas transgénicas contra los canales Shal y Shaw mencionadas en el párrafo anterior. De manera conjunta a la generación y evaluación de las líneas de moscas que porten a las dominantes negativas contra los canales Shaker y Shab, en esta misma etapa del proyecto expresaremos específicamente a las dominantes negativas con las cuales ya contamos (Shal y Shaw) en los MBs de Drosophila. La expresión específica de las dominantes negativas será dirigida por la línea de moscas 7A2, que posee una construcción para expresión delimitada a los MBs (7A2-Gal4). Para monitorear los efectos de las dominantes negativas sobre los canales Shal y Shaw realizaremos registros electrofisiológicos de la amplitud de las corrientes de K+ de neuronas de los MBs, marcadas con GFP, dispersadas agudamente. Para monitorear los efectos de los RNAis contra los canales Shal y Shaw sobre la densidad de estos canales en los MBs marcados con GFP, realizaremos inmunodetecciones para documentar los posibles cambios en la presencia de estos canales en la membrana neuronal utilizando microscopia confocal. La principal contribución de esta etapa del proyecto será demostrar que es posible establecer líneas de moscas transgénicas que expresen dominantes negativas o RNAis contra los canales de K+, específicamente en los MBs, que se desarrollen hasta su etapa adulta y que puedan ser utilizados para el estudio de la participación de los canales de K+ en memoria y aprendizaje. Este punto no ha podido ser resuelto en estudios previos._x000D_ Durante la segunda etapa del proyecto pretendemos realizar registros extra e intracelulares en los MBs de moscas silvestres y en las líneas transgénicas de Drosophila donde se expresen las dominantes negativas o los RNA de interferencia contra los canales de K+, para caracterizar y estudiar con mayor detalle a los fenómenos de facilitación y/o depresión sináptica, plasticidad de corto plazo inducida por estimulación tetánica y/o LTP. La principal contribución de esta etapa será la caracterización del papel de los canales de K+ en los fenómenos de plasticidad sináptica, específicamente de las neuronas de los MBs, involucrados en aprendizaje y memoria _x000D_ La última etapa del proyecto corresponde a un estudio más fino del posible papel de los canales de K+ en memoria y aprendizaje. Pretendemos construir líneas de moscas que expresen temporalmente, de manera inducible, a los distintos inhibidores de los canales de K+. Para estos utilizaremos el sistema tripartito GAL80;GAL4/UAS que permite regular la expresión espacio-temporal de un gen de interés. De esta manera podremos prender y apagar a

046.#.#.j: 2019-11-14 12:26:40.706

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No entro en nada

No entro en nada 2

Registro de colección universitaria

Inhibición de la expresión de los canales de K+ shal, shab y shaw en los cuerpos fungiformes de Drosophila melanogaster

Instituto de Biotecnología, UNAM, Portal de Datos Abiertos UNAM, Colecciones Universitarias

Licencia de uso

Procedencia del contenido

Entidad o dependencia
Instituto de Biotecnología, UNAM
Entidad o dependencia
Dirección General de Asuntos del Personal Académico
Acervo
Colecciones Universitarias Digitales
Repositorio
Portal de Datos Abiertos UNAM, Colecciones Universitarias
Contacto
Dirección General de Repositorios Universitarios. contacto@dgru.unam.mx

Cita

Dirección de Desarrollo Académico, Dirección General de Asuntos del Personal Académico (DGAPA). "Inhibición de la expresión de los canales de K+ shal, shab y shaw en los cuerpos fungiformes de Drosophila melanogaster", Proyectos Universitarios PAPIIT (PAPIIT). En "Portal de datos abiertos UNAM" (en línea), México, Universidad Nacional Autónoma de México.

Descripción del recurso

Título
Inhibición de la expresión de los canales de K+ shal, shab y shaw en los cuerpos fungiformes de Drosophila melanogaster
Colección
Proyectos Universitarios PAPIIT (PAPIIT)
Responsable
Ignacio López González
Fecha
2010
Descripción
Aunque en años recientes se ha logrado un gran avance en la identificación de los elementos y mecanismos moleculares involucrados en los procesos de aprendizaje y memoria asociativa, poco se sabe sobre el papel fisiológico de los canales de K+ dependientes de voltaje shal, shab y shaw en la determinación de las propiedades electrofisiológicas de las estructuras del cerebro de Drosophila involucradas en estos procesos._x000D_ Como se menciona en el protocolo, las evidencias experimentales han demostrado que la corriente de K+ tipo A, una corriente iónica transitoria, está involucrada en la adecuada formación de la memoria asociativa en varias especies, incluyendo a los mamíferos. Recientemente se demostró que los cuerpos fungiformes (MBs) expresan los mensajeros para los canales de K+ tipo Shaker, Shal, Shab y Shaw, de los cuales Shaker y Shal codifican para corrientes de K+ tipo A (Gasque et al., 2005). Las moscas mutantes para el canal de K+ Shaker presentan deficiencias en el aprendizaje asociativo. Sin embargo, un estudio reciente demostró que los canales Shaker se expresan solo en una fracción menor en las neuronas de los MBs, el área del cerebro de la mosca responsable de la memoria olfativa asociativa. Esta última observación abre la posibilidad de que algún otro canal de K+ nativo de los MBs, como son Shal, Shab y Shaw, pueda tener un papel relevante en memoria y aprendizaje. En el presente proyecto tenemos como objetivo evaluar si los canales de K+ Shal, Shab y Shaw son importantes para determinar las propiedades electrofisiológicas de los MBs de Drosophila. Para nosotros resulta de particular interés explorar el papel del gen shal ya que este se expresa en una fracción mayor de las neuronas de los MBs y, al igual que el gen shaker, codifica para una corriente de K+ tipo A. Las características biofísicas propias de shal lo hacen el candidato más fuerte para participar en memoria y aprendizaje. Cabe mencionar que hasta la fecha, no se ha podido evaluar la participación de los canales de K+ Shal, Shab y Shaw en memoria asociativa por que no existen líneas de moscas mutantes que presenten deficiencias en la expresión de estos canales exclusivamente en los MBs. En los últimos tres años, nuestro laboratorio ha desarrollado diferentes herramientas moleculares que nos permitirán abordar el problema de la participación de los canales Shal, Shab y Shaw en los fenómenos de plasticidad sináptica relacionados con el aprendizaje y la memoria. Así, actualmente contamos con subunidades 1 dominantes negativas (Shaker V718D, Shal L371D, Shab V624D y Shaw V378D) y con RNAs interferentes (vectores psymp-UAST Shaker, psymp-UAST Shal y psymp-UAS TShab) contra los cuatro canales de K+ presentes en los MBs. Con estas construcciones, hemos generado y establecido las líneas de moscas trangénicas necesarias para realizar la inhibición específica de cada tipo de canal de K+ en los MBs de Drosophila y así evaluar la posible participación de Shal, Shab y Shaw en memoria. En este momento ya contamos con una línea de moscas transgénicas que portan a la subunidad 1 dominante negativa contra el canal de K+ Shal (denominada Shal [17]); y tres líneas independientes de moscas transgénicas que poseen a la dominante negativa contra el canal Shaw (denominadas Shaw [31F], Shaw [30/31] y Shaw [30/31.1]). De igual forma, hemos establecido 10 líneas de moscas transgénicas producidas en nuestro laboratorio que contienen a los RNAis contra los canales de K+ dependientes de voltaje. Cuatro de estas líneas de moscas portan al RNAi contra los canales de K+ tipo Shaker (Shaker [49.4], Shaker [31], Shaker [14.1R] y Shaker [14.18]); cuatro contienen el RNAi contra los canales de K+ tipo Shab (Shab [16.1], Shab [8.1], Shab [10] y Shab [21]); dos líneas portan los RNA interferentes contra los canales Shaw (Shaw2822R -1 y Shaw2822R-2); y dos líneas de moscas contienen al RNAi contra el canal de K+ tipo Shal (Shal [41] y Shal [5]). Ya hemos iniciado con la evaluación funcional in vivo de las líneas de moscas que contienen a las subunidades dominantes negativas y los RNAis contra los distintos canales de K+ y nuestros resultados recientes indican que al expresar de manera ubicua (en toda la mosca) a las dominantes negativas contra los canales Shal (Shal [17]) y Shaw (Shaw [30/31.1]) se reproduce consistentemente un fenotipo de letalidad reportado anteriormente. Esto nos indica que, al menos, las dominantes negativas hasta ahora evaluadas funcionan de manera eficiente en la mosca. Más aún, nuestras líneas de moscas transgénicas con las dominantes negativas contra los canales Shal y Shaw resultaron más eficientes que líneas de moscas que portan a los RNAis contra los mismos canales de K+ provenientes de otros centros de investigación. Como se mencionó anteriormente, la falta de este tipo de líneas de moscas transgénicas ha evitado que se pueda evaluar el papel de los canales de K+ en aprendizaje y memoria. por lo que la primera contribución importante de este proyecto son, precisamente, las líneas de moscas transgénicas arriba mencionadas (Shal [17]), Shaw [30/31.1], etc). Consideramos que estas líneas transgénicas podrían ser de interés para otros grupos involucrados en biofísica y neurociencias lo que nos permitirá establecer diferentes colaboraciones._x000D_ La primera parte del proyecto corresponde a la generación y evaluación de las líneas de moscas que porten a las dominantes negativas contra los canales Shaker y Shab que nos faltan. Para esto seguiremos la misma estrategia experimental que utilizamos para establecer las líneas transgénicas contra los canales Shal y Shaw mencionadas en el párrafo anterior. De manera conjunta a la generación y evaluación de las líneas de moscas que porten a las dominantes negativas contra los canales Shaker y Shab, en esta misma etapa del proyecto expresaremos específicamente a las dominantes negativas con las cuales ya contamos (Shal y Shaw) en los MBs de Drosophila. La expresión específica de las dominantes negativas será dirigida por la línea de moscas 7A2, que posee una construcción para expresión delimitada a los MBs (7A2-Gal4). Para monitorear los efectos de las dominantes negativas sobre los canales Shal y Shaw realizaremos registros electrofisiológicos de la amplitud de las corrientes de K+ de neuronas de los MBs, marcadas con GFP, dispersadas agudamente. Para monitorear los efectos de los RNAis contra los canales Shal y Shaw sobre la densidad de estos canales en los MBs marcados con GFP, realizaremos inmunodetecciones para documentar los posibles cambios en la presencia de estos canales en la membrana neuronal utilizando microscopia confocal. La principal contribución de esta etapa del proyecto será demostrar que es posible establecer líneas de moscas transgénicas que expresen dominantes negativas o RNAis contra los canales de K+, específicamente en los MBs, que se desarrollen hasta su etapa adulta y que puedan ser utilizados para el estudio de la participación de los canales de K+ en memoria y aprendizaje. Este punto no ha podido ser resuelto en estudios previos._x000D_ Durante la segunda etapa del proyecto pretendemos realizar registros extra e intracelulares en los MBs de moscas silvestres y en las líneas transgénicas de Drosophila donde se expresen las dominantes negativas o los RNA de interferencia contra los canales de K+, para caracterizar y estudiar con mayor detalle a los fenómenos de facilitación y/o depresión sináptica, plasticidad de corto plazo inducida por estimulación tetánica y/o LTP. La principal contribución de esta etapa será la caracterización del papel de los canales de K+ en los fenómenos de plasticidad sináptica, específicamente de las neuronas de los MBs, involucrados en aprendizaje y memoria _x000D_ La última etapa del proyecto corresponde a un estudio más fino del posible papel de los canales de K+ en memoria y aprendizaje. Pretendemos construir líneas de moscas que expresen temporalmente, de manera inducible, a los distintos inhibidores de los canales de K+. Para estos utilizaremos el sistema tripartito GAL80;GAL4/UAS que permite regular la expresión espacio-temporal de un gen de interés. De esta manera podremos prender y apagar a
Tema
Memoria y aprendizaje; Neurociencias
Identificador global
http://datosabiertos.unam.mx/DGAPA:PAPIIT:IN217210

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