Enfoques moleculares y celulares en el análisis funcional de un receptor tipo cinasa en las etapas iniciales de la nodulación (2da. etapa)
Instituto de Biotecnología, UNAM, Portal de Datos Abiertos UNAM, Colecciones Universitarias
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506.#.#.a: Público
650.#.4.x: Biotecnología y Ciencias Agropecuarias
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336.#.#.3: Registro de colección de proyectos
336.#.#.a: Registro de colección universitaria
351.#.#.b: Proyectos Universitarios PAPIIT (PAPIIT)
351.#.#.a: Colecciones Universitarias Digitales
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270.1.#.p: Dirección General de Repositorios Universitarios. contacto@dgru.unam.mx
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100.1.#.a: Rosana Sánchez López
524.#.#.a: Dirección de Desarrollo Académico, Dirección General de Asuntos del Personal Académico (DGAPA). "Enfoques moleculares y celulares en el análisis funcional de un receptor tipo cinasa en las etapas iniciales de la nodulación (2da. etapa) ", Proyectos Universitarios PAPIIT (PAPIIT). En "Portal de datos abiertos UNAM" (en línea), México, Universidad Nacional Autónoma de México.
720.#.#.a: Rosana Sánchez López
245.1.0.a: Enfoques moleculares y celulares en el análisis funcional de un receptor tipo cinasa en las etapas iniciales de la nodulación (2da. etapa)
502.#.#.c: Universidad Nacional Autónoma de México
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307.#.#.a: 2019-05-23 18:40:21.491
653.#.#.a: Interacción planta-microorganismo; Bioquímica, biología molecular, genética y genómica
506.1.#.a: La titularidad de los derechos patrimoniales de este recurso digital pertenece a la Universidad Nacional Autónoma de México. Su uso se rige por una licencia Creative Commons BY 4.0 Internacional, https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/legalcode.es, fecha de asignación de la licencia 2012, para un uso diferente consultar al responsable jurídico del repositorio por medio de contacto@dgru.unam.mx
041.#.7.h: spa
500.#.#.a: Con el propósito de incrementar nuestro conocimiento sobre la cascada de transducción de señales activada en el pelo radical de leguminosas (frijol) incubados con factores Nod, el presente proyecto aborda el análisis de la interacción entre PvSymRK y PvSINA6 (ver apartado LOGROS DEL PROYECTO VIGENTE IN221209), así como la identificación de otros posibles interactores de este receptor. Se plantean diferentes aproximaciones experimentales._x000D_ Por un lado, será importante determinar la co-expresión y colocalización de PvSymRK y PvSINA6 en pelos radicales de frijol, así como la caracterización functional de PvSINA6 a través del análisis del fenotipo asociado al silenciamiento (RNAi) de este gene y/o uso dominantes negativas (carentes del dominio RING o del dominio SINA) en comparación con la sobre-expresión de PvSINA6. Igualmente nos proponemos determinar la especificidad de la interacción entre PvSymRK y PvSINA6 mediante ensayos de BiFC y sistema de dos híbridos en levadura usando combinaciones de dominios cinasa de otros receptores y otros miembros de la familia PvSINA identificados. Por otro lado, nos planteamos la caracterización bioquímica de la interacción a través de ensayos de co-inmunoprecipitación, inmuno-detección de ubiquitinación, transfosforilación in vitro, entre otros._x000D_ Respecto a la identificación de otros posibles interactores de PvSymRK, proponemos una estrategia en dos etapas: 1) diseño, expresión in planta y caracterización del receptor quimérico AtCERK1-PvSymRK-cMyc (HA u otra etiqueta) constituído por el ectodominio (región extracelular que une quitina) del receptor de quitina de A. thaliana CERK1 fusionado a las regiones yuxtamembranal y cinasa (intracelular) de de PvSymRK. El diseño postula que la incubación en presencia de quitina activará el dominio cinasa de la quimera AtCERK1-PvSymRK-cMyc (expresado en pelos radicales raíces transgénicas). 2) co-inmunoprecipitación (“pulldown” con anticuerpos anti-cMyc o etiqueta correspondiente) de complejos proteícos asociados al receptor AtCERK1-PvSymRK-cMyc (activado por incubación con quitina) e identificación de componentes del complejo mediante LC-MS/MS (cromatografía líquida acoplada a esprectrómetros de masas capaces de producir espectros en tandem). De encontrar comprometida la funcionalidad del receptor quimérico AtCERK1-PvSymRK-cMyc o incapacidad de activación de la cinasa, alternativamente nos hemos planteado realizar los experimentos de “pulldown” y proteómica utilizando la versión PvSymRK-cMyc (utilizada por nuestro grupo en un estudio previo). La secuencia o identidad de los posibles interactores encontrados con esta estrategia nos indicará los pasos a seguir para el análisis bioquímico de interacción proteína-proteína._x000D_
046.#.#.j: 2019-11-14 12:26:40.706
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last_modified: 2019-11-22 00:00:00
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Instituto de Biotecnología, UNAM, Portal de Datos Abiertos UNAM, Colecciones Universitarias
Dirección de Desarrollo Académico, Dirección General de Asuntos del Personal Académico (DGAPA). "Enfoques moleculares y celulares en el análisis funcional de un receptor tipo cinasa en las etapas iniciales de la nodulación (2da. etapa) ", Proyectos Universitarios PAPIIT (PAPIIT). En "Portal de datos abiertos UNAM" (en línea), México, Universidad Nacional Autónoma de México.