Efecto de la histamina y bradicinina sobre expresión y función de los receptores semejantes a Toll 2 y 4 en fibroblastos gingivales humanos y en cardiomiocitos
Facultad de Odontología, UNAM, Portal de Datos Abiertos UNAM, Colecciones Universitarias
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100.1.#.a: Gloria Gutiérrez Venegas
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720.#.#.a: Gloria Gutiérrez Venegas
245.1.0.a: Efecto de la histamina y bradicinina sobre expresión y función de los receptores semejantes a Toll 2 y 4 en fibroblastos gingivales humanos y en cardiomiocitos
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506.1.#.a: La titularidad de los derechos patrimoniales de este recurso digital pertenece a la Universidad Nacional Autónoma de México. Su uso se rige por una licencia Creative Commons BY 4.0 Internacional, https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/legalcode.es, fecha de asignación de la licencia 2009, para un uso diferente consultar al responsable jurídico del repositorio por medio de contacto@dgru.unam.mx
041.#.7.h: spa
500.#.#.a: La enfermedad periodontal es una padecimiento odontológico que afecta al 80% de la población en el mundo. En sus etapas iniciales se caracteriza por la inflamación de la encía (gingivitis), que al prolongarse conduce al formación de bolsas periodontales y en sus fases avanzadas a la resorción del hueso alveolar lo que conlleva a la pérdida del órgano dentario. Entre los factores que ocasionan la enfermedad periodontal se encuentran algunos de los microorganimos presentes en la placa dentobacteriana como Porphyromonas gingivalis que es un microorganismo Gram-negativo y que entre sus componentes se encuentra el lipopolisacárido que promueve la expresión de citocinas proinflamatorias por parte las células más abundantes de la encía, los fibroblastos gingivales humanos. Así mismo, en la placa están presentes microorganismos Gram-positivos que como Streptococcus que contienen ácido lipoteicoico que la igual que el lipopolisacárido promueven la expresión de citocinas inflamatorias. Además la enfermedad periodontal estos microorganismos pueden ocasionar otras enfermedades como la endocarditis. En los sitios en donde se ocasionan las lesiones se presentan moléculas como el factor de necrosis tumoral, interleucina 1-beta y moléculas como la histamina y bradicinina. Es importante mencionar que los fibroblastos gingivales humanos presentan en su superficie receptores TLR2 y TLR4 (cuyos ligandos son el ácido lipoteicoico y lipopolisacárido) y receptores a bradicinina e histamina. La bradicinina es un péptido fisiológica y farmacológicamente activo, del grupo de la quinina perteneciente a las proteínas y que está formado por nueve aminoácidos. Es un potente vasodilatador dependiente del endotelio, que provoca la contracción de músculo liso no vascular, aumenta la permeabilidad vascular y también está relacionado con el mecanismo del dolor. En ciertos aspectos actúa de manera similar a la histamina y, al igual que ésta, se secreta en las vénulas y no en las arteriolas. Por otra parte, la histamina, es una amina hidrofílica vasoactiva y es la principal molécula liberada por las células cebadas. Su liberación promueve la activación de diferentes tipos celulares entre los que se encuentran células endoteliales, monocitos, macrófagos y eosinófilos. Sin embargo, la capacidad de la histamina en la activación de respuestas intracelulares en fibroblastos gingivales humanos no ha sido evaluada hasta este momento. En este trabajo investigaremos los efectos que tiene la histamina o bradicinina y los componentes de bacterias Gram-negativas (lipopolisacáridos) y Gram-positivas (ácido lipoteicoico ) sobre la modulación de respuestas inflamatorias de los fibroblastos gingivales humanos. MATERIALES Y MÉTODOS: En cultivos celulares primarios de fibroblastos gingivales humanos y en cardiomiocitos H9c2 se estudiará el mecanismo de acción de la histamina, bradicinina, lipopolisacárido o ácido lipoteicoico mediante ensayos de Western blot, inmunocitoquímica, ensayo de RT-PCR, elisa y transfección. Los fibroblastos gingivales humanos o cardiomiocitos se incubarán con histamina o bradicinina, a fin de estudiar si estos ligandos regulan la expresión de los receptores semejantes a Toll (TLR-2) 2 y (TLR-4) 4 que reconocen ácido lipoteicoico y lipopolisacárido respectivamente. Posteriormente los fibroblastos gingivales humanos o los cardiomiocitos se incubarán con lipopolisacárido o ácido lipoteicoico en presencia o ausencia de histamina o bradicinina y se estudiará su efecto sobre la síntesis de ciclooxigenasa-2 y expresión y liberación de prostaglandina E2 y sobre la activación del factor de transcripción NF-κB. RESULTADOS: Para cumplir con los objetivos señalados esperamos realizar los siguientes experimentos. 1.- Determinar el efecto de histamina y bradicinina en la regulación de la expresión de los receptores TLR-2 y 4 en fibroblastos gingivales humanos y en cardiomiocitos (H9c2). Se estudiarán los efectos de histamina o bradicinina en fibroblastos gingivales humanos y en cardiomiocitos, sobra la inducción de la expresión de los receptores TLR 2 y 4 a nivel transcripcional (RT-PCR) y traduccional (Western blot). Se caracterizará al receptor involucrado (mediante la utilización de antagonistas). 2.- Caracterizar el efecto de histamina y bradicinina sobre la expresión de Ciclooxigenasa2 y síntesis de PGE2 en fibroblastos gingivales humanos y cardiomiocitos (H9C2). Se estudiará el efecto de la histamina o bradicinina sobre la expresión de Ciclooxigenasa 2 (RT-PCR y Western Blot ) y sobre la expresión de prostaglandina E2 (ELISA). 3.- Estudiar si histamina y LPS o bradicinina y LPS actúan de forma sinérgica en la inducción de ciclooxigenasa 2 y síntesis de PGE2 en fibroblastos gingivales humanos y en cardiomiocitos (H9C2). Se caracterizarán los tiempos y dosis de expresión de ciclooxigenasa2 y de prostaglandina E2 y se determinará si los ligandos actúan de forma sinérgica. CONCLUSIÓN: Esta investigación es interesante porque la enfermedad periodontal es provocada por la síntesis permanente de moléculas promotoras de respuestas inflamatorias como la ciclooxigenasa2. Deseamos caracterizar los mecanismos de regulación de la respuesta inmune innata.
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