Caracterización transcriptómica de cepas de Escherichia coli productoras de shikimato
Instituto de Biotecnología, UNAM, Portal de Datos Abiertos UNAM, Colecciones Universitarias
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506.#.#.a: Público
650.#.4.x: Biotecnología y Ciencias Agropecuarias
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336.#.#.3: Registro de colección de proyectos
336.#.#.a: Registro de colección universitaria
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100.1.#.a: Francisco Gonzalo Bolívar Zapata
524.#.#.a: Dirección de Desarrollo Académico, Dirección General de Asuntos del Personal Académico (DGAPA). "Caracterización transcriptómica de cepas de Escherichia coli productoras de shikimato", Proyectos Universitarios PAPIIT (PAPIIT). En "Portal de datos abiertos UNAM" (en línea), México, Universidad Nacional Autónoma de México.
720.#.#.a: Francisco Gonzalo Bolívar Zapata
245.1.0.a: Caracterización transcriptómica de cepas de Escherichia coli productoras de shikimato
502.#.#.c: Universidad Nacional Autónoma de México
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653.#.#.a: Fisiología microbiana; Biotecnología y genómica
506.1.#.a: La titularidad de los derechos patrimoniales de este recurso digital pertenece a la Universidad Nacional Autónoma de México. Su uso se rige por una licencia Creative Commons BY 4.0 Internacional, https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/legalcode.es, fecha de asignación de la licencia 2009, para un uso diferente consultar al responsable jurídico del repositorio por medio de contacto@dgru.unam.mx
041.#.7.h: spa
500.#.#.a: El compuesto oseltamivir fosfato, comercialmente conocido como Tamiflú, es un potente inhibidor de las neuraminidasas presentes en el virus de la gripe. Este compuesto ha sido utilizado con éxito paras el tratamiento de casos de influenza aviar H5N1. Este antiviral es actualmente sintetizado utilizado como materia prima al compuesto ácido(-)-shikimco (SHK), el cual se obtiene tradicionalmente extrayéndolo del anís estrella chino. Se prevé que en caso de una pandemia de influenza aviar, la cantidad de SHK existente a nivel mundial en la actualidad no podrá abastecer la demanda mundial parea la síntesis de Tamiflú. Una alternativa para la obtención de SHK es su producción biotecnológica por medio de fermentación con microorganismos. La ventaja de esta alternativa es que un proceso fermentativo pude ser escalado para contender más eficientemente con la demanda del producto deseado. Como un primer resultado en este contexto, en nuestro grupo de trabajo hemos iniciado un proyecto de investigación apoyado económicamente por CONACYT (Proyecto CONACYT Fondo Salud 44126), cuyo primer objetivo fue la obtención de una cepa de E. coli sobreproductora como resultado de la inactivación de las enzimas que utilizan el SHK, incremento del flujo de carbono hacia la síntesis de compuestos aromáticos e incremento la disponibilidad de los precursores metabólicos para esta vía. Estas modificaciones se realizaron por inactivación de genes cromosomales y sobre expresando genes que codifican enzimas limitantes de la vía del SHK. Como resultado se obtuvo una cepa de Escherichia coli denominada PB12.shk (PTS- glc+ aroL-aroK- aroGfbr tktA aroB aroE), que es capaz de producir 7.05 gramos de SHK / litro, con un rendimiento de 0.282 g SHK / g glucosa, resultados que son comparables con los mejores valores reportados en la literatura. El análisis de algunos de los parámetros de cultivo en lote de esta cepa en fermentadores a una escala de 1 L en un medio mineral suplementado con 25 g/L de glucosa y 15 g/L de extracto de levadura, muestran un crecimiento exponencial durante las primeras 8 horas de fermentación alcanzando una DO600nm de 11.8, consumiendo únicamente 4 g / l glucosa. A partir de este momento mantiene la cepa un crecimiento a una velocidad menor hasta el final de la fermentación para alcanzar una DO600nm final de 17.2 (50 horas). Asociado a esta disminución en la velocidad de crecimiento después de las 8 horas de cultivo, se observa una rápida disminución en la cantidad de glucosa residual para consumirla completamente después de 32 horas. De forma interesante, aunque la producción de SHK se presenta a partir de las 2 horas de cultivo, a partir de las 8 horas y hasta el final de la fermentación se observa la mayor producción de este compuesto. Estos resultados, sugieren que durante la fase exponencial de crecimiento (primeras 8 horas de cultivo) y durante la fase de mayor producción de SHK se presenta la expresión diferencial de diversos genes involucrados en el transporte de glucosa, metabolismo central de carbono, vía de producción de SHK y diversos reguladores en esta cepa sobreproductora. El objetivo de esta propuesta es la caracterización fina de la cepa de producción obtenida respecto a su progenitora, mediante el análisis del transcriptoma por PCR en tiempo real (RT-PCR). Por otro lado, se pretende aprovechar los diferentes fondos genéticos de las cepas derivadas de cada una de las modificaciones genéticas realizadas para obtener la PB12.shk, en otras cepas utilizadas también en nuestro laboratorio para evaluar una diversidad de fondos genéticos con potencial para la sobreproducción de SHK.
046.#.#.j: 2019-11-14 12:26:40.706
264.#.1.b: Dirección General de Asuntos del Personal Académico
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last_modified: 2019-11-22 00:00:00
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Instituto de Biotecnología, UNAM, Portal de Datos Abiertos UNAM, Colecciones Universitarias
Dirección de Desarrollo Académico, Dirección General de Asuntos del Personal Académico (DGAPA). "Caracterización transcriptómica de cepas de Escherichia coli productoras de shikimato", Proyectos Universitarios PAPIIT (PAPIIT). En "Portal de datos abiertos UNAM" (en línea), México, Universidad Nacional Autónoma de México.